Article Lucotte/Roy-Henry traduction

Article Lucotte/Roy-Henry traduction

Message par BRH » Samedi 05 Avril 2014 21:30:31

Note : traduction corrigée et annotée de la main du Pr Gérard Lucotte.

Résumé : Nous avons obtenu un profil à haute résolution, du chromosome Y-STR de Hugues de Bourbon, le descendant mâle, français, vivant, de la famille issue de Naundorff. Ce profil STR a été comparé à ceux récemment publiés de trois membres de la maison de Bourbon (Larmuseau et al, Eur J Hum, Genet 2013 ; oct.9). Dans notre propre système de comparaison basé sur 27 STRs, le profil Hugues de Bourbon est très semblable à ceux des autres de Bourbon publiés, différant d'eux par six mutations seulement. Hugues de Bourbon possède aussi le même STR de différenciation sub-terminal (S21), et appartient au sub-haplogroupe du chromosome Y R1b1a2a1a1. Ces données sont suffisantes pour inclure Hugues de Bourbon comme un membre de la Maison de Bourbon.

Mots-clés : Chromosome Y haplotype, les membres de la famille de Bourbon ; polymorphisme binucléotidiques (SNP) ; courtes répétitions en tandem (STR).

INTRODUCTION :


Karl Wilhem Naundorff (initialement écrit Naundorf) est mort en 1845 à Delft (Pays-Bas), où il a été enterré sous le nom de Louis-Charles, duc de Normandie, "Louis XVII" ; Sur sa tombe on peut lire : "Ici repose Louis XVII, roi de France et de Navarre, né à Versailles le 27 mars 1785, Décédé le 10 août 1845", Louis XVII était le nom de Louis-Charles (1785-1795 ?), le deuxième fils de la famille royale française : Louis XVI (1754-1793) et Marie-Antoinette (1755-1793). Selon les documents officiels, Louis-Charles est mort de la tuberculose dans la prison du Temple (à Paris) le 8 juin 1795.

Au début du 19ème siècle, plusieurs dizaines de personnes ont prétendu être le fils de Louis XVI. Le plus célèbre d'entre-eux est Naundorff, qui est venu à Paris en mai 1833. Il a vraisemblablement réussi à présenter des preuves suffisantes pour convaincre les anciens membres de la Cour de Versailles de son illustre ascendance (et en particulier Madame de Rambaud, ancienne camériste du Dauphin). Naundorff a été expulsé vers l'Angleterre par les autorités françaises, après 26 jours de prison, en juillet 1836.

Il y a une quinzaine d'années, Jehaes et al 1 excluait Naundorff comme fils de Marie-Antoinette sur la base des séquences de l'ADN mitochondrial (ADN mt) à partir de ses restes par rapport aux séquences obtenues à partir de cheveux de deux soeurs de Marie-Antoinette, de Marie-Antoinette elle-même, et avec les séquences obtenues à partir des échantillons d'ADN de deux descendants maternels vivants. Très récemment 2 le même Laboratoire a produit les profils STR du chromosome Y de trois membres différents de la Maison de Bourbon. L'objectif du présent article est de comparer ces profils à celui d'Hugues de Bourbon, descendant direct, français, de Naundorff, afin d'élucider les relations patrilinéaires entre lui et ces membres de la famille Bourbon.

Hugues de Bourbon (né en 1974) est le descendant vivant de 4ème génération (figure 1) de Karl Naundorff. La descendance de Naundorff porte aujourd'hui légalement (arrêt confirmatif du tribunal de la Seine, le 26 novembre 1913) en France, le nom "de Bourbon" ; initialement avaient eu lieu les jugements de Bois-Le-Duc (12 mars 1888) et de Maëstricht (20 mai 1891). Les tribunaux ont accordé l'usage du nom "de Bourbon" aux membres de la famille de Naundorff. Hugues de Bourbon est le fils unique de Charles-Louis-Edmond de Bourbon (Charles XII de jure), dernier dynaste de la branche aînée, de sorte que Hugues pourrait être l'actuel roi de jure, depuis 2008.
Hugues de Bourbon lui-même, intéressé par sa propre ascendance masculine, nous a contacté en juin 2011.

MATERIEL ET METHODES

Hugues de Bourbon (H) est le proposant pour cette étude. Des échantillons de frottis buccal de cet ADN ont été recueillis après consentement éclairé du donneur. L'extraction d'ADN a été effectuée en utilisant la méthode manuelle classique décrite précédemment. 3

Le procédé de transfert sudiste a été utilisé à l'aide de la sonde p49f, Taq I,4 pour la détermination à faible résolution (de l'haplotype du chromosome Y) deH. Les SNPs M343, P25, P297, M269, L23, L51, L11 et S21 / U106 ont ensuite été successivement génotypé sur l'échantillon par PCR en temps réel, afin d'établir son haplogroupe initial et les sous-haplogroupes ultérieurs ; les sous-clades successifs R1b ont été caractérisés selon les règles (dernière mise à jour en 2013) de la société Internationale de Généalogie génétique (ISOGG) 5. Les profils Y-STR à haute résolution ont été obtenus en utilisant le kit (FTDNA) Y-ADN 67 et le kit Genetrack-Biolabs (GB) Y-ADN 66, selon les instructions données par ces deux sociétés. L'haplotype composite obtenu a été soumis au prédicteur de Whit Athey 6, pour obtenir des probabilités pour les haplogroupes présumés.

RESULTATS


Par l'analyse en transfert sudiste, nous avons montré que H appartient à l'haplotype XV (A3, C1, D2, F1, I1). Selon nos publications antérieures 7-9, l'haplotype XV est l'haplotype principal en Europe de l'Ouest, atteignant plus de 70% des hommes français basques.

L'haplotype XV correspond 10 au grand haplogroupe R1b, déterminé par le SNP M343 et décrit comme tel dans le premier arbre de cet haplogroupe publié 11.

SNP successifs testés

Le tableau 1 montre les huit SNPs successifs (après M343) génotypés comme positifs pour H. Le SNP final de cette liste (S21/U106) correspond au clade R1b1a2a1a1. Les cartes de fréquence publiées pour l'Europe occidentale 12, 13 concernant les fréquences de S21 montrent des concentrations relativement élevées (environ 35%) de ces marqueurs génétiques dans les Pays-Bas, au Danemark et en Allemagne du Nord ; en France, les fréquences baissent de 5-10% dans l'Est à 1-5% dans le reste du pays, tombant à moins de 1% dans le bassin d'Aquitaine.

Les Bourbons étudiés par Larmuseau et al 2 ont été tous les trois assignés au SNP Z381 et à son sous-haplogroupe correspondant. Nous avons génotypés H pour ce SNP particulier : il est Z381- ; par conséquent, contrairement aux autres Bourbons testés, H appartient au sous-haplogroupe R1b1a2a1a1 (l'ISOGG clade équivalent à celui trouvé par Larmuseau et al 2 pour Z381* est R1b1a2a1ac). La fréquence du sous-haplogroupe Z381* n'est pas connue jusqu'à présent pour la plupart des régions de l'Ouest-Europe ; en Flandres 14, les fréquences estimées varient entre 5,5% et 12,9% selon les différentes régions.

Un profil Y-STR complet


Nous avons obtenu un profil complet du chromosome Y-STR de H en utilisant les kits FTDNA Y-ADN 67 et Y-ADN 66. H appartient au clade R1b1a2a1a1 dans la nomenclature précédente (dans la nomenclature précédente d'ISOGG2012) par calcul avec le prédicteur d'haplogroupe Whit Athey.

Nous avons comparé les profils Y-STR (tableau 2) entre H et les trois Bourbons déjà publiés 2 : Axel de Bourbon-Parme (A), Sixte-Henri de Bourbon-Parme (SH) et Joao Henrique d'Orléans-Bragance (JH). Un nombre total de 27 marqueurs STR-Y ont été comparés.

Les marqueurs palindromiques STR DYS385.a et .b, DYS459.a et .b, DYS464.a, .b, .c et .d, et DYS724 = CDY.a et.b ont été exclus des comparaisons, en raison de notre expérience personnelle relative aux familles royales en France (de Napoléon 1er 15) : ces marqueurs STR palindromiques ne sont pas si faciles à utiliser pour comparer des valeurs d'allèles pour les branches latérales. En fait, les mécanismes précis de la variation individuelle pour ces sortes de marqueurs sont mal comprises (K Norwed, communication personnelle). Nous n'avons pas de données pour comparer pour ce qui concerne DYS365.

Le tableau 2 montre, dans notre propre système de comparaison pour 27 marqueurs génétiques STRs, qu'il y a un allèle variable (DYS570 = 16) sur 27 entre A et SH (séparés par 5 méïoses). Il existe deux allèles variables (DYS389. I = 14 et DYS449 = 29) entre JH et les deux autres profils A et SH, respectivement séparés par 23 et 22 méïoses. Six allèles variables seulement (DYS390 = 24, DYS391 = 12, DYS447 = 24, DYS456 = 15, DYS607 = 16 et GATA- H4 = 10) distinguent H et SH, si nous prenons SH comme le Bourbon de référence : BOR (parce qu'il n'a aucune mutation, par rapport aux autres, dans ce système de comparaison).
Parmi les allèles variables entre H et SH, deux (allèles 24 pour DYS390 et pour DYS447) correspondent à un gain ou à une perte d'une unité de répétition (1 étape de mutation) pour ces STRs, trois (allèles 12 pour DYS391, allèle 15 pour DYS456 et allèle 10 de GATA- H4) correspondent à un gain ou une perte de deux unités répétées (à 2 étapes de mutations) et un (allèle 16 pour DYS607) correspond à une perte de trois unités de répétition (3 étapes de mutation). Nous ignorons le nombre de méïoses entre H et le dernier ancêtre commun Louis XIII, si c'est le cas, mais si Naundorff est Louis XVII, ce nombre est de 11.

Les taux de mutation 16 pour les loci variables sont toujours dans la gamme 10-3 (tableau2) ; l'allèle variable 29 pour les JH et H (pour DYS449) correspond au taux de mutation le plus élevé pour des STRs observés jusqu'à présent 16 . Nous ne connaissons pas les taux de mutation de YCALL.a et .b, mais, en raison de la fiabilité observée de ces marqueurs génétiques à ce STR palindromique dans nos enquêtes précédentes 15, 17, nous les avons inclus dans la présente étude.

Caractère unique de ce profil Y-STR


Le profil de 67 STR de H est unique, car il n'a pas été trouvé dans la base de données FTDNA. Nous avons constaté par eSearch que la personne la plus proche trouvée dans cette base de données (ID: HMTT2) diffère de H pour 12 allèles, mais son haplogroupe est inconnu pour le moment. Le tableau 3 donne la liste des quatre individus dans la base de données, différents de H par 14, 15, 16 et 18 allèles seulement. Les deux premiers (un individu en Ecosse et l'autre d'origine inconnue) diffèrent de H par 14 et 15 allèles, respectivement ; les deux sont R1b1a2a1a. Le troisième individu proche (16 allèles de différence) originaire d'Italie, appartient à l'haplogroupe R1b1a2a1a1b3c1 (L21) et le quatrième (différence de 18 allèles), d'Italie aussi, appartient à l'haplogroupe R1b1a2a1a1b (P312). Ainsi, une valeur de différence allélique jusqu'à 14-15 délimite les 67 profils Y-STR correspondant à l'haplogroupe R1b1a2a1a1.

DISCUSSION


Karl Wilhem Naundorff n'a pas été retenu dans la Maison de Bourbon à l'occasion d'une étude génétique initiale 1 , sur la base de non-correspondance de ses séquences ADN mitochondriales hypervariables HVR1 et HVR2 détectées dans son humérus droit présumé, et les séquences d'Anne de Roumanie, liée à Marie-Antoinette par sept étapes de transmission génétique en lignée féminine. Un autre argument dans la même direction concerne la perte d'un site intermédiaire (situé dans l'ADNmt entre HVR1 et HVR2) Haelll à partir de l'os de Naundorff, par rapport à son gain chez Anne de Roumanie et dans les cheveux de Marie-Antoinette et de ses soeurs.

Mais à présent, de nouvelles informations sur les polymorphismes de l'ADN du chromosome Y semblent bien nous raconter une autre histoire : l'ADN du chromosome Y de Hugues de Bourbon, descendant vivant à la quatrième génération de Naundorff, montre de très fortes similitudes avec ceux des trois membres de la Maison de Bourbon (Axel de Bourbon-Parme, Sixte-Henri de Bourbon-Parme et Joao Henrique d'Orléans-Bragance) publiés récemment 2 : son profil STR (courtes répétitions en tandem), dans notre système de comparaison de 27 marqueurs génétiques, ne diffère que par six mutations de celui des trois autres Bourbons.

En outre, Hugues de Bourbon appartient au même sous-clade de SNP différenciation (clade R1b1a2a1a1) que celui des trois autres Bourbons étudiés précédemment ; le sous-haplogroupe R-Z381 est un sous-groupe de R-S21 (S21 étant l'antépénultien dans la lignée), un haplogroupe trouvé à des fréquences relativement élevées aux Pays-Bas et en Allemagne du Nord.

Six mutations de différences (résultats obtenus ici), pour 27 STRs comparés entre Hugues de Bourbon et les trois autres Bourbons précédemment génotypés 2, est un critère pertinent pour inclure (génétiquement) Hugues de Bourbon dans la famille de Bourbon : en utilisant leur propre lot de marqueurs STR testés 18, Larmuseau et al 19, dans leurs études pilotes en Belgique sur les familles d'origines récentes (principalement depuis la Révolution Industrielle au début du 19e Siècle) ont retenu un nombre de > 6 différences (sur 38) comme borne de référence pour exclure certains individus issus de familles identifiées par leurs noms de famille (ou des noms voisins).

Un autre aspect apparent de certaines divergences entre le profil STR de Hugues de Bourbon et ceux des trois autres Bourbons étudiés est l'observation qu'il en diffère par trois mutations "2 étapes" pour DYS391, DYS456, et pour GATA- H4, et même par "3 étapes" pour DYS607, alors que pour Hugues par rapport aux autres pour DYS90 et DYS447, comme pour les Bourbons comparés entre eux pour le DYS389. I, DYS449 et DYS510- c'est le mode "1 étape" pour les mutations correspondantes. Mais le modèle (connu) à "une étape" de variation pour les marqueurs STR n'est certainement pas aussi simple pour les SNPs. Dans notre expérience sur la famille Napoléon 15, par exemple, nous avons établi que DYS454 (initialement considéré comme le marqueur le plus stable à ce moment 20) change de "4 étapes" en une seule génération, étant identifié comme un marqueur génétique caractéristique de la lignée "Jérôme" (le plus jeune frère de Napoléon).

Mais le biais le plus important dans ce genre de comparaisons entre le profil de STR de Hugues de Bourbon et ceux des trois autres publiés récemment est dû au choix (P. Delorme ; communication personnelle) des Bourbons utilisés pour les comparaisons, et par conséquent du Bourbon de référence (BOR). Si, probablement, le dernier ancêtre commun dans l'arbre généalogique (voir Larmuseau et al . 2) est Louis XIII, Sixte-Henri de Bourbon-Parme n'est en fait certainement pas le BOR (il a été artificiellement choisi ici en tant que tel, car il n'avait pas de mutations par rapport à tous les autres) ; Sixte-Henri est séparé d'Axel de Bourbon-Parme par cinq méïoses seulement, et il n'est pas surprenant que les deux aient pratiquement le même profil Y-STR. Axel dérive latéralement à partir de la racine principale au niveau de Louis le Grand Dauphin, et il est séparé de l'ancêtre commun par treize méïoses. Joao Henrique d'Orléans-Bragance, le plus éloigné des trois, est un descendant de Philippe, duc d'Orléans (latéralement le frère de Louis XIV) et il est séparé de Louis XIII par douze méïoses. Si Naundorff est Louis XVII, il est en lignée directe, séparé de Louis XIII par 11 méïoses.

La conséquence pratique de ces résultats est que, dans cette hypothèse, les trois profils Bourbons déjà publiés doivent être comparés par rapport à Hugues de Bourbon, et non le contraire. Pour d'autres comparaisons, il serait nécessaire d'étudier d'autres membres de la Famille de Bourbon, situés plus près de la branche principale. Une autre nécessité pour des comparaisons efficaces est de les génotyper avec un ensemble complet de marqueurs génétiques STR, comme nous le faisons pour Hugues de Bourbon.
La découverte de nouveaux marqueurs SNP dans l'haplogroupe R1b1a2 (M269) est maintenant un domaine en pleine expansion. En conséquence du "1000 Génome Project", un ensemble de nouveaux SNPs situés au-dessus et au-dessous de Z381 a été récemment décrit 21. Leur utilisation pourrait nous permettre de détecter le point de branchement précis dans l'arbre où Hugues de Bourbon se sépare des autres membres de Bourbon.

Mais l'information la plus importante à vérifier est l'affirmation initiale 1, sur la base de l'ADNmt, que Naundorff n'est pas Louis XVII. En fait, une telle affirmation repose sur la constatation par ces auteurs d'une non-concordance entre les variations de la séquence de l'ADN mitochondrial entre Anne de Roumanie (un échantillon de sang) et Naundorff (échantillon osseux) ; mais les échantillons osseux de Naundorff proviennent du cercueil qui a été ouvert à l'occasion de la restauration de son lieu de sépulture en 1950 à Delft, et ses échantillons de cheveux -dont les auteurs n'ont jamais réussi à obtenir des séquences d'ADN mitochondrial- ont été conservés dans des enveloppes scellées prises comme échantillon à la même occasion (donné par l'archiviste de la ville de Delft).

Si Naundorff est Louis XVII, l'haplogroupe ADNmt de ses cheveux doit être le type maternel "Habsbourg" (P Germain ; communication personnelle). Nous sommes maintenant engagés dans une étude, basée sur des cheveux de Naundorff authentifiés prélevés après sa mort, afin de clarifier ce point important.

CONCLUSION

Les résultats présentés dans la présente étude sur la comparaison des marqueurs génétiques du chromosome Y entre Hugues de Bourbon et trois descendants actuels de la Maison de Bourbon récemment publiés (Larmuseau et al 2) établissent que :
1/ Hugues de Bourbon appartient au même sous-clade de patrilinéage SNP de différenciation actuelle (clade R1b1a2a1a1, marqueur SNP sous-terminal S21) que les autres Bourbons étudiés (ces Bourbons n'ont pas été testés pour S21 mais, étant Z381 +, sont obligatoirement S21 +).
2/ le profil haute résolution (dans notre propre système de 27 STR de comparaison) de Hugues de Bourbon est grandement similaire à ceux des autres Bourbons, différents d'eux par six mutations seulement.
3/ Sur la base de ce critère de six mutations, Hugues de Bourbon peut être considéré comme étant un membre de la famille de Bourbon, selon les règles de relations généalogiques établies dans des familles avec des noms de famille identiques. Il faut noter que ce seuil de six mutations de différences concernent les familles d'origines relativement récentes 19. Ainsi, parce que la famille de Bourbon est très ancienne (elle peut être retracée au moins depuis Henri IV, pour les dynasties royales françaises), un tel critère de six mutations de différences correspond à une valeur minimale.

Liste des abréviations


Remerciements


Nous remercions Hugues de Bourbon pour le don de son échantillon d'ADN. Merci aux laboratoires FTDNA et GB pour leurs résultats concernant les SNPs ET STRs du chromosome Y ; nous remercions beaucoup Peter Hrechdakian qui était notre expert en ce domaine. L'historien indépendant Bruno Roy-Henry a été à l'origine du projet. Cette étude fait partie des enquêtes génétiques développées à l'Institut d'anthropologie Moléculaire sur les familles royales en France.


Références
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21 Rocca RA, Magoon G, Reynolds DF et al : Discovery of Western European R1b1a2 Y chromosome variants in 1000 Genomes Project data ;
an online community Approach. PLOS ONE 2012 ; 7 : e41634.
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